製品情報

高速抗原抗体反応試薬Bullet ImmunoReaction Buffer

本製品は、イムノブロッティングにおいて、抗原抗体反応を高速化する抗体希釈液です。通常、抗体反応は 1 時間~一晩実施しますが、本製品を使用することで、反応時間を約半分へ短縮することが可能です。

特長

  • 抗体反応時間を約半分へ短縮
  • Ready to use
  • 1 液構成なので一次および二次抗体反応で使い分け不要

実施例 1

大豆アレルゲンタンパク質(Gly m 4)の検出

本製品を用いて、大豆アレルゲンタンパク質(Gly m 4)の検出を行いました。本製品を使用することにより、 抗体反応時間を大幅に短縮できることがわかります。

短時間プロトコール通常プロトコール
ブロッティング像 p1-jitan-BIRB_o85%.png p1-jitan-5%skimmilk_o85%.png p1-tuujyou-BIRB_o85%.png p1-tuujyou-5%skimmilk_o85%.png
抗体希釈液 本製品 5% スキムミルク 本製品 5% スキムミルク

一次抗体

Anti Gly m 4 Rabbit Polyclonal Antibody(ST0225)(自家調製) 1,000 倍希釈

30 分(室温) 一晩(冷蔵)

二次抗体

Stabilized Peroxidase conjugated Goat Anti-Rabbit(H+L)(Thermo Fisher Scientific) 400 倍希釈

30 分(室温) 60 分(室温)

実験条件

サンプル 無調整豆乳(市販品)20 倍希釈
ブロッキング 5% スキムミルク 室温 60 分
検出 ECL(GE ヘルスケア・ジャパン)/ X 線フィルム 
露光時間 短時間プロトコール 8 分 / 通常プロトコール 1 分

データご提供:近畿大学 農学部 応用生命化学科 森山 達哉 教授 / 矢野 えりか 研究員

性能確認

抗体の反応時間と反応性

本製品、0.1%-tTBS を抗体希釈液として使用し、ウェスタンブロッティングを実施しました。本製品を使用することにより、反応時間を約半分(冷蔵で一晩反応させている場合は室温で 30~60 分)へ短縮可能であることがわかります。

一次抗体反応時間15 分30 分60 分120 分一晩(冷蔵)
二次抗体反応時間15 分30 分60 分120 分60 分
本製品 p2-Bullet15.png p2-Bullet30.png p2-Bullet60_1.png p2-Bullet120.png p2-Bullet-hitoban.png
0.1%-tTBS p2-tTBS15.png p2-tTBS30.png p2-tTBS60_1.png p2-tTBS120.png p2-tTBSon.png

実験条件

サンプル HeLa 細胞タンパク質抽出液(左)2 µg、(右)0.4 µg
ブロッキング Bullet Blocking One for Western Blotting(#13779) 室温 5 分
一次抗体 β-Actin抗体(C4)(Santa Cruz #sc-47778) 1,000 倍希釈 各反応時間、室温にて反応(一晩反応のみ、冷蔵にて反応) 
二次抗体 Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7574) 40,000 倍希釈 各反応時間、室温にて反応
検出 Chemi-Lumi One Super(#02230)/ LAS-3000(High モード) 露光時間 5 分

実施例 2

β-Actin タンパク質の検出

本製品を用いて、 β-Actin タンパク質の検出を行いました。本製品を使用することにより、抗体反応時間を短縮できることがわかります。

抗体希釈液本製品0.1%-tTBS5% スキムミルク
ブロッティング像 p2-jisirei2-burotingzou_1.png

一次抗体

Anti β-Actin Rabbit Antibody(CST) 5,000 倍希釈

20 分 60 分

二次抗体

Anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody[HRP] (Novus) 5,000 倍希釈

20 分 30 分

実験条件

サンプル マウス白色脂肪細胞抽出液(10 µg/Lane)
ブロッキング 5% スキムミルク 室温 60 分
検出 ImmunoStar® LD(Wako)/ X 線フィルム 露光時間 15 分
ImmunoStar® は富士フイルム和光純薬株式会社の登録商標です。

【使用者の評価】
通常、5% スキムミルクを抗体希釈液として使用し、一次抗体を 60 分、二次抗体を 30 分それぞれ反応させている。本製品を使用することにより、一次抗体、二次抗体共にわずか 20 分(短時間)の反応時間で同様のバンドが確認できた。

データご提供:京都大学大学院 農学研究科 食品分子機能学分野 後藤 剛 准教授 / 小森 雅臣 研究員

実施例 3

さまざまな抗原検出における使用例

本製品を使用することにより、さまざまな抗原検出において抗体反応時間を 60 分から 30 分へ短縮できました。

抗原Flotillin-1β-ActinNup98
ブロッ
ティング像
HRP 標識一次抗体使用
p2-flotllin-1-tTBS.png p2-flotllin-1-BIRB.png p2-actin-tTBS.png p2-actin-BIRB.png p2-Nup98-tTBS.png p2-Nup98-BIRB-5.png p2-Nup98-BIRB-30.png
抗体希釈液 tTBS 本製品 tTBS 本製品 tTBS 本製品
一次抗体 60 分 30 分 60 分 30 分 60 分 30 分
Flotillin-1 抗体(C-7) (Santa Cruz #sc-133153) 1,000 倍希釈 Human anti Human Actin Beta:HRP(Bio-Rad #HCA147P)1,000 倍希釈 Nup98 抗体(C-5)(Santa Cruz #sc-74578) 1,000 倍希釈
二次抗体 60 分 30 分 60 分 30 分
Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7574) 40,000 倍希釈 Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7574) 40,000 倍希釈

露光時間

15 分 15 分 15 分 5 分 15 分

実験条件

サンプル (Flotillin-1)HeLa 細胞タンパク質抽出液(左)2 µg、(右)0.4 µg
(β-Actin, Nup98) HeLa 細胞タンパク抽出液(左)10 µg、(右)2 µg
ブロッキング Bullet Blocking One 室温 5 分
検出 Chemi-Lumi One Super / LAS-3000(High モード)

高速化移行

移行チャート

p3-ikoutyato_o.png

性能比較

抗体希釈液本製品tTBS HIKARI A 社

A 社
(Protein-free)

B 社
ブロッ
ティング像
p3-BIRB.png p3-tTBS_4.png p3-HIKARI.png p3-A.png p3-A-protein-free.png p3-B_4.png
一次抗体 30 分 60 分
EGF Receptor (D38B1)XP® Rabbit mAb(CST #4267) 1,000 倍希釈
XP® は Cell Signaling Technology, Inc. の登録商標です。
二次抗体 30 分 60 分
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7187) 50,000 倍希釈

実験条件

サンプル HeLa 細胞タンパク質抽出液(左)10 µg、 (右)2 µg
ブロッキング Bullet Blocking One 室温 5 分
検出 Chemi-Lumi One Super(#02230) / LAS-3000(High モード) 露光時間 3 分

使用方法

本製品で目的とする抗体濃度に希釈し、抗原抗体反応を行ってください。 反応時間は従来の半分を目安に短縮してください。 (一次抗体反応を冷蔵で一晩反応させている場合は、室温で 30~60 分を目安に短縮してください。)

詳細は製品添付文書をご参照ください。(添付文書は e-Nacalai からご覧いただけます。)

価格表

製品名規格貯法製品番号容量オンライン
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Bullet ImmunoReaction Buffer SP(免疫化学用) 冷蔵 18439-85 500 mL e-Nacalai.jpg

関連製品 Bullet シリーズによる超高速化

Bullet ImmunoReaction Bufferの他にも、電気泳動からウェスタンブロッティングを高速化する製品を販売しています。これらを組み合わせることで、電気泳動からウェスタンブロッティングの超高速化を実現します。

Bullet シリーズ従来手法
ブロッ
ティング像
p4-tyoukousokuka-Bullet.png p4-tyoukousokuka-jyuuraihou.png
サンプル HeLa 細胞タンパク質抽出液 5 µgより 2 倍希釈系列
電気泳動

Bullet PAGE One Precast Gel,
5-15%, 17 wells    

400 V 10 分

Laemmli法組成ゲル
10%, 18 well

200 V 60 分
転写

Bullet Semi-Dry Transfer One

25 V 10 分 セミドライウェスタンブロッティング用転写緩衝液 10 V 45 分
ブロッキング

Bullet Blocking One

5 5% スキムミルク 60分

一次抗体

GAPDH Antibody
(Novus #NB300-322)
10,000 倍希釈

Bullet ImmunoReaction Buffer
で抗体を希釈
30 分 0.1%-tTBS で抗体を希釈 60 分

二次抗体

Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP]
(Pre-adsorbed)(Novus #NB7187)
200,000 倍希釈

Bullet ImmunoReaction Buffer
で抗体を希釈

30 分 0.1%-tTBS で抗体を希釈 60 分

検出

Chemi-Lumi One Super / LAS-3000(High モード) 露光時間 5 分

計(洗浄時間を含む)

約 2時間 約 5時間 30 分

Bulletシリーズ価格表

分類製品名規格貯法製品番号容量オンライン
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プレキャストゲル Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 13wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13077-04 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-11%, 17wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13078-94 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 13wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13079-84 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13080-44 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 6%, 13wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13081-34 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 6%, 17wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13082-24 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 8%, 13wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13083-14 10 sheets e-Nacalai.jpg
Bullet PAGE One Precast Gel, 8%, 17wells SP(電気泳動用) 冷蔵 13084-04 10 sheets e-Nacalai.jpg
転写緩衝液 Bullet Semi-dry Transfer One SP(免疫化学用) 室温 15353-01 1 L e-Nacalai.jpg
ブロッキング試薬 Bullet Blocking One for Western Blotting SP(免疫化学用) 冷蔵 13779-56 50 mL e-Nacalai.jpg
13779-14 200 mL
13779-01 1 L

抗原抗体反応試薬

Bullet ImmunoReaction Buffer SP(免疫化学用) 冷蔵 18439-85 500 mL e-Nacalai.jpg

染色剤

Bullet CBB Stain One(Ready To Use) SP(電気泳動用) 冷蔵 13542-94 50 mL e-Nacalai.jpg
13542-65 500 mL
13542-81 1 L

※記載の内容は、'18 年 9 月現在の情報に基づいております。
研究者の皆様のご所属等の情報は、データご提供時の情報に基づいております。