如何清洗色谱柱?
Q13. 如何清洗色谱柱?
- 如何祛除色谱柱中的缓冲液,盐或酸?
使用不含缓冲液,盐或酸的溶剂冲洗色谱柱10-15 分钟。
(例如,缓冲液为甲醇20 mmol/l磷酸缓冲溶液=50:50时,使用甲醇:水=50:50冲洗)
注意;
如果有机溶剂和水的比例发生改变,盐可能会被析出。 - 如何冲洗色谱柱中的杂质以达到平稳的基线?
充分溶解样品, 并且使用强洗脱剂冲洗。
类型 可使用溶剂 / 添加剂 反相 - 样品不是蛋白质时:
甲醇或四氢呋喃
反相高效液相色谱柱清洁套装 (产品号 08966-30) - 样品是蛋白质时:
50-70%的乙腈水溶液(内含0.1% 三氟乙酸)。
注意; 当有机溶剂浓度升高时某些蛋白质可能会被析出。
正相 正相甲醇,四氢呋喃,乙醇 富勒烯色谱柱 1,2,4-三氯苯和其他 Sugar-D, NH₂, HILIC 乙腈 : 水= 50 : 50
*Sugar-D 和 HILIC可以使用100%水冲洗注意;
不能使用碱性溶液(pH 7.5以上)或者强酸溶液(pH 1.5以上)冲洗。 碱性溶液会溶解硅胶,酸性溶液会使固定相断裂。 - 样品不是蛋白质时:
- 如何祛除堵塞色谱柱柱头的杂质?
用溶剂以平时分析速度一半的流速反相冲洗。
注意;
在冲洗时断开色谱柱与检测器的连接。 - 如果柱压高,请参考技术信息3第191页。
Q14. 如何保存色谱柱?
- 短时间存储(数日)
使用不含缓冲液,盐或酸的溶剂冲洗色谱柱10-15 分钟后保存。
(例如,当使用甲醇 20 mmol/l磷酸缓冲溶液= 50 : 50作为流动相时,使用甲醇 : 水 = 50 : 50冲洗) - 长时间存储( 一个月以上)
请使用以下溶剂以避免真菌,干涩和柱受损。
色谱柱 | 推荐使用溶剂 | |
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反相 | 反相高效液相色谱柱储存溶液 (产品号 08967-20) 甲醇 : 水= 70 : 30, 乙腈 : 水= 70 : 30 |
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正相 | 正相卤素或无酸的有机溶剂(己烷 : 乙腈 = 90 : 10) | |
离子交换, 凝胶渗透,疏水相互作用 | 0.05%叠氮化钠溶液等 | |
富勒烯色谱柱 | 甲苯等 | |
Sugar-D, NH₂, HILIC | 乙腈 : 水 = 70 : 30 |
注意;
请将色谱柱保管于阴暗平稳处。
Q15. 色谱柱的寿命?
色谱柱的寿命取决于使用条件(样品,浓度,盐,酸,有机溶剂的pH值)
注意;
样品处理不充分是最常见的影响色谱柱寿命短的原因。