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峰形差

T1. 峰形差

Poor peak shapes
症状 原因 解决方案
只有特定样品拖尾 碱性化合物和填料之间发生了离子交换相互作用。 使用含有较少硅醇基的色谱柱（C18-MSII）。或在流动相中加入0.1-1%的酸。
金属配位化合物和填料之间发生了络合反应。 在流动相中加入5mmol/l乙二胺四乙酸二水合物（EDTA・2Na）。
在样品和填料之间发生了氢键相互作用。 改变有机溶剂 （如乙腈变为甲醇）。
所有样品均拖尾 填料中产生了空隙或色谱柱劣化。 更换色谱柱。
（如果在更换色谱柱后拖尾情况没有改善） 样品在色谱柱外发生了扩散。 减少死体积 （请参考Q25）。
前沿峰 注入了大量洗脱性或pH值与流动相有较大差异的样本溶剂。 用流动相溶解样品。如果样品不能溶解于流动相，请先溶解到可用溶剂中然后用流动相稀释。
减少进样量至1/2-1/10
注意；
可能会引起尖峰或宽锋。
宽峰 1
高分子量样品
（MW: 2,000以上）		 大分子量蛋白质不能通过填料孔径。 使用反相宽孔径色谱柱，COSMOSIL Protein-R。
进样量太大。 减少进样量至1/2-1/10
注意；
可能产生拖尾峰。
如果只有某种特定的样品产生宽峰，可能是由于有机化合物吸着在填充剂上。 推荐使用拥有高回收率的COSMOSIL Protein-R。
所有样品均严重拖尾，可能是色谱柱劣化。 更换色谱柱。
使用疏水色谱法色谱柱（HIC）时，样品溶液中的硫酸铵浓度太低。 调整硫酸铵的浓度至1 mol/l 或更多。
宽峰 2
低分子量样品
（MW: 2,000以下）		 进样量太大。 减少进样量至1/2-1/10
注意；
可能会引起拖尾峰。
如果只有某种特定的样品产生宽峰，可能是由于有机化合物吸着在填充剂上。 请使用不同填料的色谱柱。
（COSMOSIL 5C18-MS-II 适用于碱性样品。它对于碱性样品很少有吸收。）
所有样品均出现宽峰，可能是色谱柱劣化。 更换色谱柱。
某些特定的峰出现尖峰或峰裂 含有两种以上的样品并且它们没有完全分离。 寻找可以分离这两种样品的条件。
流动相和样品溶剂的溶解性差异太大。 用流动相溶解样品。如果样品不能溶解于流动相中，请先溶解到可用溶剂中然后用流动相稀释。
减少进样量至1/2到1/10。
解离样品和非解离样品混合 调节流动相的pH值至离子样本的pKa±2以上。
所有样品的峰都出现尖峰或峰裂 流动相和样品溶剂的溶解性差异太大。 用流动相溶解样品。如果样品不能溶解于流动相中，请先溶解到可用溶剂中然后用流动相稀释。
减少进样量至1/2 到1/10。
色谱柱劣化。 更换色谱柱。

T2. 鬼峰

分离方式 原因 解决方案
<反相色谱法>
梯度洗脱法		 鬼峰由水中杂质引起。 使用新的高效液相色谱级蒸馏水。
使用预柱。
<反相色谱法>
蛋白质样品的分析		 色谱柱上吸附有前一次分析的样品，鬼峰由此样品引起 冲洗色谱柱。
推荐使用不易吸附样品的COSMOSIL Protein-R
<所有分离方式>
样品溶剂和流动相不同。		 鬼峰由样品溶剂引起。 使用与流动相一样的溶剂溶解样品。
用流动相溶解样品。如果样品不能溶解于流动相中，请先溶解到可用溶剂中然后用流动相稀释。
<所有分离方式>
无样品载入，只注入流动相时出现鬼峰
（同时每次分析时，峰面积都有减少）		 进样器污染。 用注射器注入20毫升可祛除污染物的溶剂（如甲醇）清洗进样器
微量进样针污染。 用可祛除污染物的溶剂（如甲醇，氯仿或水）清洗进样针。推荐使用超声波清洗。
其他 样品受到污染或劣化。 重新配置样品。
流动相中有稳定剂。 使用不含稳定剂的高效液相色谱级溶剂。